青霉素G剂量用国际单位U表示，理论效价为青霉素G钠1670U≈1mg，青霉素G钾1598U≈1mg。其他半合成青霉素均以毫克（mg）为剂量单位。
青霉素G通常作静脉滴注或肌内注射。该药因脂溶性低而难以进入细胞内，主要分布于细胞外液。能广泛分布于全身各部位，肝、胆、肾、肠道、精液、关节液及淋巴液中均有大量分布。
房水和脑脊液中含量较低*，无炎症脑脊液中药物浓度仅为血药浓度的1%～3%，炎症时药物相对较易进入，脑脊液中药物浓度可达血药浓度的8%，大剂量静脉滴注可达有效浓度。
青霉素G主要以原形迅速经尿排泄，约10%经肾小球滤过排出，90%经肾小管分泌排出，t1/2为0.5～1.0小时。
剂量过大、静脉给药过快或鞘内注射时，可因脑脊液药物浓度过高而导致青霉素脑病，表现为腱反射增强、肌肉痉挛、抽搐、昏迷等，尤其多见于老年人、婴儿及肾功能不全患者。因此，青霉素G不宜用于鞘内注射。
丙磺舒、阿司匹林、吲哚美辛、保泰松可竞争性抑制β-内酰胺类抗生素从肾小管的分泌，使之排泄减慢，血药浓度增高，可增强β-内酰胺类抗生素的作用，并延长作用时间。
尿酸等物质也经肾小管分泌，青霉素与尿酸竞争可能会加重痛风。
为延长青霉素G的作用时间*，可采用难溶的混悬剂普鲁卡因青霉素（双效西林）（一次注射80万U，可维持24小时）和油剂苄星青霉素（长效西林）（一次注射120万U，可维持15天），肌内注射后在注射部位缓慢溶解吸收。这两种制剂的血药浓度均很低，不适用于急性或重症感染，仅用于轻症患者或预防感染。
浓度依赖性：杀菌效果主要与药物浓度有关，如氨基糖苷类、喹诺酮类。
时间依赖性：与药物在体内大于MIC的时间（%t>MIC）相关，与血药峰浓度关系不密切。MIC升高时，T>MIC的时间明显缩短。
如：β-内酰胺类（青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类），天然大环内酯类（红霉素），糖肽类（万古霉素、林可霉素）。
青霉素G抗菌作用很强，作为繁殖期杀菌剂，在细菌繁殖期低浓度抑菌，高浓度杀菌，为治疗敏感的G+球菌和杆菌、G-球菌及螺旋体所致感染的首选药：
①大多数G+球菌：
a)甲型溶血性链球菌：心内膜炎，由于病灶部位形成赘生物，药物难以透入，常需特大剂量静脉滴注并与氨基糖苷类抗生素合用以获得协同作用。
b)乙型溶血性链球菌：蜂窝织炎、丹毒、猩红热、咽炎、扁桃体炎。
c)肺炎链球菌：大叶性肺炎、脓胸、支气管肺炎。
d)敏感金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌：疖、痈、败血症等。
金黄色葡萄球菌、淋病奈瑟球菌、肺炎链球菌等对本药极易产生耐药性。
②G+杆菌：
a)白喉棒状杆菌：白喉
b)炭疽杆菌
c)产气荚膜梭菌：气性坏疽，流产后产气荚膜梭菌所致败血症。
d)破伤风梭菌：破伤风。
e)乳酸杆菌
青霉素G对白喉棒状杆菌、破伤风梭菌、产气荚膜梭菌产生的外毒素无效，故必须加用抗毒素血清。
③G-球菌：
a)脑膜炎球菌：流行性脑脊髓膜炎。
b)敏感淋病奈瑟球菌
④少数G-杆菌：敏感流感嗜血杆菌、百日咳鲍特菌等。
青霉素G对大多数G-杆菌作用较弱，对肠球菌不敏感，对真菌、原虫、立克次体、病毒等无作用。
⑤螺旋体、放线菌属：首选用于放线杆菌病、钩端螺旋体病、梅毒（梅毒螺旋体）、回归热（回归热螺旋体）的治疗。
青霉素V属于口服窄谱青霉素类抗生素。其抗菌谱和抗菌机制同青霉素G，但抗菌活性较青霉素G低。
其最大的特点为耐酸，口服吸收好，但易被青霉素酶水解，对大多数金黄色葡萄球菌无效。
用于轻度敏感菌感染、恢复期的巩固治疗和防止风湿热复发与感染性心内膜炎的预防用药。
